TEMEL VETERİNER MİKROBİYOLOJİ VE İMMÜNOLOJİ

Fiksasyon: Bakterilerin lamda tespit edilmesi, lama sabitlenmesi.

Basit Boyama Yöntemleri: Karbol fuksin ile boyama, Kristal viyole ile boyama, Metilen mavisi ile boyama, Negatif boyama

Ziehl-Neelsen Boyama: Tüberküloz etkenlerinin (mikobakteriler) hücre duvarında fazla miktarda balmumu tabakasının bulunmasından dolayı bu bakterilerin diğer boyama yöntemleri ile boyanması mümkün olmamaktadır. Bu nedenle boya içerisine fenol konur ve alttan hafifçe ısıtılarak balmumu tabakası yumuşatılarak bakterinin boyayı alması sağlanır. Bu boyama yönteminde, mikobakteriler veya asidorezistans mikroorganizmalar pembe kırmızı renkte, diğer bakteriler ise mavi renkte görülürler.

Pseudomonas aeruginosa ortama yaydığı pigment nedeniyle besiyerinin (nutrient agar) rengini yeşile dönüştürür.

EMB agar: Escherichia coli identifikasyonu

Agar: Besiyerlerinin katı hale getirilmesi için en çok kullanılan jelleştiricidir. Çoğu kez diğer agarlı besiyerleri ile karıştırılmaması için “agar agar” olarak anılır. Agar deniz yosunlarından elde edilir. Agarın katılaştırma (jelleştirme) özelliğini bileşimindeki D-galakton sağlar. Bileşiminde ayrıca inorganik tuzlar, çok az miktarda protein benzeri maddeler ve eser miktarda yağ vardır.

Mikroaerofilik atmosferde (%5-10 CO2) üreyen mikroorganizmalara örnek olarak Brusella türleri, Francisella tularensis, Hemofilus türleri, Taylorella equigenitalis gibi bakteriler verilebilir. Anaerobik atmosferde üreyen bakterilere ise Klostridium türleri, Fusobakterium türleri, Bacteroides türleri ve Actinomyces bovis gibi mikroorganizmalar örnek verilebilir.

Campylobacter jejuni ve Serpulina hyodysenteriae en iyi 42°C’de, Leptospira interrogans serovarları 28-30°C’de, Listeria monocytogenes beyinden soğuk zenginleştirme yöntemi ile üretilmesi esnasında, Yersinia enterocolitica ve Yersinia pseudotuberculosis’in dışkı örneklerinde soğuk zenginleştirme yöntemi ile üretilmesi esnasında 4°C’de optimal ürerler.

Koagulaz Testi: Test patojenik stafilokokların belirlenmesinde kullanılan enzimatik bir testtir. Testte reaktif olarak taze hazırlanmış ya da ticari olarak dondurularak kurutulmuş tavşan plazması kullanılır.

Kligler’s iron agar: Bu besiyeri hidrojen sülfit üretimini ortaya koyan kimyasallar ile birlikte %0.1 oranında glukoz ve %1 oranında laktoz içermektedir.

Karbol fuksin ile boyama: Bu boyama yöntemi Campylobacter türleri, Serpulina hyodysenteriae ve Fusobacterium necrophorum gibi bakterilerin görüntülenmesinde kullanılır. Kurutulmuş ve fikse edilmiş preparatlar üzerine, karbol fuksin solüsyonu konur ve 5-10 saniye lam üzerinde bırakıldıktan sonra boya dökülür ve hafif akan su ile yıkanır. Kurutma kağıdı ile veya havada kurutulduktan sonra üzerine sedir yağı konarak immersiyon objektifi ile bakılır. Mikroorganizmalar kırmızı renkte görülürler. Doğru cevap A'dır.

Kristal viyole ile boyama: Hazırlanan preparat üzerine boya solüsyonundan konarak 20-30 saniye kadar beklenir. Sürenin sonunda boya dökülür, preparat su ile yıkanır, kurutulur ve immersiyon objektifi ile muayene edilir. Mikroorganizmalar bu boyama yönteminde mor renkte görülürler. Doğru cevap B'dir.

Metilen mavisi ile boyama: Bu amaçla Löffler metilen mavisi solüsyonu kullanılır. Preparat üzerine boya solüsyonu konarak 5-8 dakika bekletilir. Preparat üzerine boya solüsyonu konarak 5-8 dakika bekletilir. Boya dökülür, preparat su ile yıkanır, kurutulur ve immersiyon objektifi ile muayene edilir. Mikroorganizmalar bu boyama yönteminde mavi renkte görülürler. Doğru cevap C'dir.

Negatif boyama: Bu boyama yönteminde mikroorganizmalar yerine saha boyanır. Karanlık olan sahada mikroplar renksiz veya parlak olarak görülürler. Boya olarak nigrosin veya çin mürekkebi kullanılır. Lam üzerine bir damla boya ve sonra bir damla kültür koyarak yayılır ve ince bir froti hazırlanır. Kuruduktan sonra muayene edilir. Bu boyama yöntemi kapsül ve spiroketleri incelemek için kullanılır. Doğru cevap D'dir.

Bileşik boyama yöntemleri:

Doğru cevap A'dır.

Nutrient agarın kullanım alanı: Temel besiyeri. Nazlı üreme özelliğinde olmayan bakterilerin üretilmesi. Doğru cevap A'dır.

Kanlı agarın kullanım alanı: Nazlı üreme özelliğinde olanlar da dahil birçok bakterinin üretilmesi. Doğru cevap B'dir.

MacConkey agarın kullanım alanı: Enterobakteriler ve diğer bazı Gram negatif bakterilerin üretilmesi. Doğru cevap C'dir.

Brilliant green agarın kullanım alanı: Salmonella ve bazı bakterilerin izolasyonu. Doğru cevap D'dir.

İndol Testi: Bu test bakterilerin bir aminoasit olan triptofanı ayrıştırarak indol meydana getirebilme yeteneğini belirlemek için kullanılır. Aynı zamanda bakterilerin cins [(Salmonella (-), Edwardsiella (+), E. coli (+), Klebsiella (-), Enterobakter (+)] ve tür düzeyinde [Pasteurella multocida (+), Mannheimia haemolytica (-), Proteus mirabilis (-), P. vulgaris (+)] ayrımında işe yarar. Doğru cevap C'dir.